培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080),85%;北美胎牛血清(United States,GIBCO,貨號(hào)16000-044),15%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
產(chǎn)品描述:公司提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織,公司提供的人源原代細(xì)胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。公司提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項(xiàng);3、公司售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
產(chǎn)品名稱 | 人膠質(zhì)瘤組織源細(xì)胞 |
英文名稱 | HumanCancer:GliomaTissuesCells |
貨號(hào) | CS-X3525 |
細(xì)胞分類:
一種:
是凍存產(chǎn)品,由氮直液接拿出,干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種,也較少使用這種方式,因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大,一旦細(xì)胞狀態(tài)不好,很難說是細(xì)胞自身不行,還是復(fù)蘇沒操作好;另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大,也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的方式,快遞時(shí)間也很難控制,多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量;干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種:
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞,QC通過后,T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶,排除復(fù)蘇造成影響,常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大,只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證:我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè),100%進(jìn)口來源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
以下是公司正在熱銷的相關(guān)產(chǎn)品:
0.375ng/ml人Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)ELISA試盒pUNO1-mTNK1
0.375ng/ml人Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)ELISA試盒pUNO1-mTNNI2
3.75pg/ml人Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)ELISA試盒pUNO1-mTOLLIP
46.9pg/ml人Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)ELISA試盒pUNO1-mTOMM70A
0.188ng/ml人抗膠原蛋白抗體(CLA)ELISA試盒pUNO1-mTRADD
18.75pg/ml人大腸菌素(colicin)ELISA試盒pUNO1-mTRAF1
9.375pg/ml人神經(jīng)保護(hù)因子(CVNPF)ELISA試盒 pUNO1-mTRAF2
0.094ng/ml人凝因子Ⅻ(FⅫ)ELISA試盒 pUNO1-mTRAF3a
18.75pg/ml人凝因子ⅩⅢ(FⅩⅢ)ELISA試盒pUNO1-mTRAF4
0.094ng/ml人凝因子Ⅹ(FⅩ)ELISA試盒pUNO1-mTRAF5
人膠質(zhì)瘤組織源細(xì)胞造蛋白1(HEM1)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)月桂膽固醇酯(>95.0%(GC))
多肽-N-酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶9(GALNT9)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)膽固醇酯(>95.0%(GC))
多肽-N-酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶8(GALNT8)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)膽固醇酯(>96.0%(GC)(T))
多肽-N-酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶7(GALNT7)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)庚膽固醇酯(>98.0%(GC))
G抗原8(GAGE8)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)己膽固醇酯(>95.0%(GC))
G抗原7(GAGE7)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)琥珀膽固醇酯(>97.0%(T))
G抗原6(GAGE6)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)豆蔻膽固醇酯(>98.0%(T))
G抗原5(GAGE5)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)膽固醇酯(>95.0%(GC))
G抗原4(GAGE4)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)戊膽固醇酯(>95.0%(GC)(T))
G抗原3(GAGE3)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)鄰苯二膽固醇酯(>97.0%(T))
組氨(Php)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)氯膽固醇酯(>98.0%(T))
Rabconnectin 3蛋白(RC3)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)化膽固醇,從牛脂來(>98.0%(T))
接觸蛋白6(CNTN6)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)2,4-二氯苯膽固醇酯(>98.0%(GC))
接觸蛋白5(CNTN5)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)膽固醇壬酯(>89.0%(GC))
封閉蛋白19(CLDN19)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)膽固醇壬基碳酯
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